Скоростта на ензимно катализираната реакция се влияе от pH на инкубационната среда. За всеки ензим съществува оптимално pH, при което активността му е най-висока. При стойности за pH, по-ниски и по-високи от оптималната, ензимната активност намалява.
Влиянието на pH върху ензимната активност се обяснява с факта, че за свързване на ензима със субстрата и протичане на каталитичния процес е необходима определена стенен на йонизация на дисоцииращите се групи на ензима и субстрата (ако той е йонизиращо се вещество). Степента на йонизация е функция от pH. От pH - оптимума би могло да се съди за pH на йонизиращите се групи в активния център на ензима.
Стойността на pH-оптимума за даден ензим се влияе от някои фактори: от вида на субстрата в случаите, когато ензимът може да действува на различни субстранти, от вида на буфера, от примесите, особено ако те са йонизиращи се вещества. Ако ензимът не е стабилен при оптималното pH, стойността на pH - оптимума зависи и от продължителността на инкубацията.